用血清超速离心法提取外泌体,能提取到多少
超速离心法:通过多次差速离心(如 3000g除细胞,100000g沉淀外泌体),结合 PBS 洗涤可减少可溶性蛋白残留,但需注意离心时间与转速优化。密度梯度离心:利用蔗糖/碘克沙醇梯度介质,根据密度差异分离外泌体(约13-19g/mL),蛋白质因密度不同留于梯度液中,此法纯度较高但操作复杂。
为避免血清对细胞外泌体的污染,可采用以下方法:将细胞培养用的血清通过1×105g超速离心10h以去除血清外泌体。选择无血清培养基进行细胞培养。细胞培养过程中的死细胞是否会影响外泌体的提取?会的。
细胞培养上清:建议单次提取的样品量不低于 20mL。若采用超速离心法,第一次摸索条件时,起始培液量最好 50mL 以上。如果是一些外泌体释放量低的细胞系,可能需要上百毫升。血清或血浆:单次提取量建议不低于 200μL。如果是进行超速离心,一般每 5mL 算作 1 个样本。
具体步骤包括在4℃条件下依次以300g、2000g、10000g离心去除细胞与细胞碎片,再以100000g超速离心达到分离、富集外泌体的目的。该方法操作简单,能获得较多的外泌体数量,但设备投入成本大,每次处理的样本数量较小,过程费时,且存在外泌体聚集的现象。

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